Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
10. При необходимости каждое покровное стекло готовят к изучению путем нанесения капли смеси равных объемов глицерина и раствора хлорида натрия в фосфатном буфере рН 7,4 R; удаляют с краев стекла излишки смеси.
11. Стекла изучают методом эпифлуоресценции (фильтр возбуждения 330 нм / 380 нм, барьерный фильтр LP 440 нм) при 100-400-кратном (или большем) увеличении.
12. Изучая внеядерную флуоресценцию, сравнивают микроскопическую картину тест-культур с микроскопическими картинами отрицательного и положительных контролей. Микоплазмы проявляют себя в виде точек или волокон, расположенных над цитоплазмой и иногда в межклеточном пространстве.
Испытуемый продукт выдерживает испытание, если в тест-культурах, на которые он был нанесен, нет признаков присутствия микоплазм. Результаты испытания недостоверны, если в положительных контролях не обнаруживается присутствия соответствующих тест-организмов.
Следующий раздел публикуется для информации.
СРЕДЫ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ МЕТОДА КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
Рекомендуются нижеследующие среды. Могут использоваться и другие среды при условии, что на каждой партии в присутствии и отсутствии испытуемого продукта продемонстрирована способность к поддерживанию роста микоплазм.
СРЕДЫ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ MYCOPLASMA GALLISEPTI-CUM Жидкая среда
Бульон из экстракта говяжьего сердца (1) 90,0 мл
Лошадиная сыворотка (не подвергнутая нагреву) 20,0 мл
Дрожжевой экстракт (250 г/л) 10,0 мл
Ацетат таллия (раствор концентрацией 10 г/л) 1,0 мл
Феноловый красный (раствор концентрацией 0,6 г/л) 5,0 мл
Пенициллин (20 000 Ме/мл) 0,25 мл
Дезоксирибонуклеиновая кислота (раствор концентрацией 0,6 г/л) 1,2 мл
Значение рН доводят до 7,8.
Твердая среда
Готовят так же, заменяя бульон из экстракта говяжьего сердца на агар из экстракта говяжьего сердца, содержащий агар в концентрации 15 г/л.
СРЕДЫ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ MYCOPLASMA SYNOVIAE Жидкая среда
Бульон из экстракта говяжьего сердца (1) 90,0 мл
Важнейшие витамины (2) 0,025 мл
Глюкозы моногидрат (раствор концентрацией 500 г/л) 2,0 мл
Поросячья сыворотка (инактивированная при 560С 30 минут) 12,0 мл
в-Никотинамидадениндинуклеотид (раствор концентрацией 10 г/л) 1,0 мл
Цистеина гидрохлорид (раствор концентрацией 10 г/л) 1,0 мл
Феноловый красный (раствор концентрацией 0,6 г/л) 5,0 мл
Пенициллин (20 000 Ме/мл) 0,25 мл
Смешивают растворы в-никотинамидадениндинуклеотида и цистеина гидрохлорида и через 10 минут добавляют к остальным компонентам. Значение рН доводят до 7,8.
Твердая среда
Бульон из экстракта говяжьего сердца (1) 90,0 мл
Ионагар (3) 1,4 г
Значение рН доводят до 7,8, стерилизуют автоклавированием, после чего добавляют:
Важнейшие витамины (2) 0,025 мл
Глюкозы моногидрат (раствор концентрацией 500 г/л) 2,0 мл
Поросячья сыворотка (не подвергнутая нагреву) 12,0 мл
в-Никотинамидадениндинуклеотид (раствор концентрацией 10 г/л) 1,0 мл
Цистеина гидрохлорид (раствор концентрацией 10 г/л) 1,0 мл
Феноловый красный (раствор концентрацией 0,6 г/л) 5,0 мл
Пенициллин (20 000 МЕ/мл) 0,25 мл
СРЕДЫ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОПЛАЗМ, ИМЕЮЩИХ ОТЛИЧНОЕ ОТ ПТИЧЬЕГО ПРОИСХОЖДЕНИЕ Жидкая среда
Сбалансированный солевой раствор Хэнкса (модифицированный) (4) 800 мл
Дистиллированная вода 67 мл
Экстракт из сердца и мозгов (5) 135 мл
Бульон PPLO (6) 248 мл
Дрожжевой экстракт (170 г/л) 60 мл
Бацитрацин 250 мг
Метициллин 250 мг
Феноловый красный (5 г/л) 4,5 мл
Ацетат таллия (раствор концентрацией 56 г/л) 3 мл
Лошадиная сыворотка 165 мл
Поросячья сыворотка 165 мл
Значение рН доводят до 7,4 - 7,45.
Твердая среда
Сбалансированный солевой раствор Хэнкса (модифицированный) (4) 200 мл DEAE-декстран 200 мг
Ионагар (3) 15,65 мг
Хорошо перемешивают и стерилизуют автоклавированием. Охлаждают до 1000С. Добавляют к 1740 мл вышеописанной жидкой среды.
(1) Бульон из настоя говяжьего сердца
Говяжье сердце (для приготовления экстракта) 500 г
